關鍵詞：菌種傳代 菌種資源 科研 工業生產 遺傳特性 初級細胞庫 主細胞庫 工作細胞庫 傳代次數 菌種培養 菌種保存 無菌操作

菌種傳代是微生物學實驗中一項基礎且關鍵的操作，旨在通過連續培養將微生物菌種從一代轉移到下一代，以維持其生命活力、遺傳特性及實驗所需的生理狀態。此過程對于菌種保藏、遺傳學研究、藥物篩選、發酵工藝開發等多個領域至關重要。菌種傳代技術不僅是微生物學實驗中的關鍵操作，更是保障菌種資源可持續利用的重要手段。通過精細的傳代管理與保藏策略，可以確保菌種資源的豐富性、多樣性和穩定性，為微生物學及相關領域的發展提供有力支撐。

一、菌種傳代的定義與意義

定義：菌種傳代是指將已有的純種菌株在新鮮培養基上進行繁殖，使其生長分裂成新的菌種，并保持其遺傳特性的操作。培養基可以為固體、液體或半固體，根據不同菌種選擇合適的培養基。

意義：菌種傳代對于保持微生物的純度和遺傳特性、維持微生物活力、保藏菌種資源至關重要。隨著微生物學的發展，菌種傳代對于科學研究、工業生產以及生物安全和環境保護都具有重要意義。

二、菌種分類

1.初級細胞庫：又名原始細胞庫，經鑒定可以用于科研或工作生產，并由原始細胞分裂生長形成的均一穩定的細胞群體，用于建立主細胞庫。

2.主細胞庫：經原始細胞庫傳代增殖后形成的細胞群體，用于建立工作細胞庫。主細胞庫的質量標準應高于初級細胞庫。生產企業的主細胞庫傳代次數最多不得超過兩代。

3.工作細胞庫：經主細胞庫細胞傳代增殖，達到一定代次水平的細胞群體。工作細胞庫一般分裝于冷凍管中，于超低溫冰箱（-80℃）或液氮中冷凍保存。工作細胞庫復蘇后的傳代次數應不超過批準的該細胞用于生產的最高傳代次數，最高傳代次數應根據研究結果確定，不得超過國際認可的最高傳代次數。生產企業的工作細胞庫必須限定為一代。《中國藥典》2020年版規定，試驗用菌株的傳代次數不得5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代）。

三、菌種傳代的操作步驟

1.準備：根據不同的菌種選擇合適的培養基，如瓊脂或液體培養基。

2.傳代：以瓊脂培養基為例：準備好用于傳代的冷凍管，無菌條件下用無菌水將冷凍管稀釋至培養需要的濃度，用吸管吸取適量菌懸液加入培養基中，均勻涂布，動作應輕緩。操作結束后將培養基密封包扎，放于恒溫培養間中培養。

3.觀察：定時觀察記錄菌種在培養基上的生長情況，如菌落形態、顏色和密度等。

4.保存：培養周期結束后將合格的菌種培養基裝袋放于冷藏冰箱中保存，用于科研或工業生產。

5.維持傳代：重復上述步驟，將菌種傳代到新的培養基上，以保持其遺傳特性。注意傳代次數不得超過規定的最高傳代次數。

四、菌種傳代的注意事項

1.無菌操作：在菌種傳代過程中，應保持無菌操作，避免外來雜菌的污染。

2.控制傳代次數：實驗室使用的工作菌種一般不可超過5代，防止過度傳代造成菌種變異。

3.定期檢查：定期對保存的菌種進行檢查，確保其純度和活性。超出保存周期的菌種培養基應及時銷毀，不宜繼續使用。

4.妥善保存：日常使用菌種應冷藏保存，工作細胞庫應冷凍保存。保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發性藥品，放置菌種應有專用的冰箱，并上鎖管理。

五、菌種傳代的應用

菌種傳代在工業生產、科學研究以及生物安全和環境保護等領域都有廣泛應用。在發酵工業中，菌種傳代與保藏是確保生產過程的穩定性和產品質量的關鍵環節；在科學研究領域，菌種傳代是基因工程、蛋白質工程、酶工程等研究的基礎；在生物安全和環境保護方面，菌種傳代有助于防止病原菌的傳播和擴散，保障人類和動物的安全。